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一、流式细胞仪:射流系统
悬浮缓冲液中被染色细胞样品通过流式细胞仪时,由于鞘液的作用,细胞被限制在液流的轴线上,从而能通过一个非常小的喷嘴。这种微小 的“流液束”使细胞一个接一个地通过激光。细胞/颗粒通过通道时所散射的光线将被多个检测器检测到。其中光柱前有一个检测器,称为前 向散射 (Forward Scatter,或简称 FS),而光柱的旁边则有几个检测器,称为侧向散射 (Side Scatter,或简称 SS)。荧光检测器是用作检测 由阳性染色的细胞/颗粒散发的荧光。
二、流式细胞仪:前向和侧向散射光的检测
颗粒/细胞通过光束时使光线散射,并通过前向散射 (FS) 和侧向散射 (SS) 而被检测到。散射光和荧光会被检测并一并分析。其中前向散射与 细胞大小有关,而侧向散射则取决于颗粒/细胞的密度(即胞浆颗粒数量、细胞膜尺寸)。因此,透过这种方式,根据细胞大小和密度通常可 把不同细胞群区分开。
细胞散射的光线方向与以下有关:
细胞大小(前向散射;FS)
粒度(侧向散射;SS)
下图显示绿色激光照射细胞时的光散射模式:
此技术的一个有用的例子是使用流式细胞仪分析血液样本。
侧向散射和前向散射数值都很高的庞大细胞群属较大和较高粒度的粒细胞。
单核细胞属形状较大的细胞,但粒度较低,因此其细胞群的前向散射数值高而侧向散射数值低。
前向散射较低的独立细胞群属较小的淋巴细胞和淋巴母细胞。它们不是粒状细胞,因此侧向散射也较低。
因此,这些细胞可以根据其前向散射和侧向散射分成不同的细胞群。
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